二氧化碳培養(yǎng)箱如何正確使用以延長其壽命

　　大多數(shù)細胞在培養(yǎng)過程中需要37℃、5%CO2濃度及飽和濕度的生長條件，二氧化碳培養(yǎng)箱則提供了良好的生長環(huán)境。現(xiàn)在國內(nèi)大部分的生物實驗室都采用熱導(dǎo)法培養(yǎng)箱，每臺培養(yǎng)箱耗資4.5萬~5.5萬元，使用壽命10年。根據(jù)報廢維修資料顯示，平均使用壽命為6.5年，主要原因是傳感器的損壞。CO2培養(yǎng)箱價格昂貴，我們希望它能按時或遲交服務(wù)，為正確使用，根據(jù)其結(jié)構(gòu)和性能要求，現(xiàn)介紹培養(yǎng)箱正確使用方法，以及常見故障的預(yù)防與處理。

　　一、溫度傳感器的保護

　　培養(yǎng)箱溫度由溫度傳感器控制，其正常工作要求室溫條件為25℃。在一般情況下，將1~2支水銀溫度計放在箱內(nèi)作為溫度對照。正確地操作溫度傳感器，使設(shè)定溫度數(shù)，箱面顯示數(shù)，箱內(nèi)溫度保持一致。在室溫超過30℃時，溫度傳感器的調(diào)節(jié)功能失效，出現(xiàn)箱體表面顯示溫度高于設(shè)定值，箱體內(nèi)部溫度又高于設(shè)定值，且常伴有警告聲。白天發(fā)生這種現(xiàn)象，降低室溫，使培養(yǎng)箱溫度恢復(fù)正常。如果在夜間發(fā)生，持續(xù)的高溫會導(dǎo)致細胞死亡。為了防止這種現(xiàn)象，在夏季使用培養(yǎng)箱時，無菌室應(yīng)保持室溫約25℃。

　　二、氣敏保護

　　氣敏元件主要是控制箱內(nèi)氣壓的變化。二氧化碳傳感器的正常反饋要求：進氣壓力為0.06兆帕。打開門后，箱內(nèi)的氣體消失，壓力降低。關(guān)閉后，CO2傳感器在低壓刺激下有節(jié)奏地關(guān)閉，緩慢向箱內(nèi)充氣，當(dāng)進氣壓力達到0.06兆帕?xí)r，自動停止調(diào)節(jié)。換氣瓶時，部分實驗人員為了提高進氣量，用0.1帕甚至0.2兆帕壓力快速充氣，無形中破壞了CO2傳感器。當(dāng)然這種損傷效應(yīng)無法顯示，實驗者無法察覺，反復(fù)的錯誤操作，CO2傳感器損傷累積最終致命的損害，使氣壓調(diào)節(jié)失效。當(dāng)實驗人員發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基顏色異常，細胞生長緩慢，才發(fā)現(xiàn)已經(jīng)造成無法挽回的損傷。一個氣敏傳感器要16000元，換一個也不容易。CO2傳感器的使用壽命與CO2進氣壓力的大小有關(guān)，只要對CO2傳感器進行適當(dāng)?shù)膲毫φ{(diào)節(jié)，就可以保護其性能。為了更好地調(diào)節(jié)壓力，本文將壓力調(diào)節(jié)歸納為4句話17個字：反時針?biāo)珊?，接氣瓶，順時針減壓，壓力0.06。安民告示，貼在門上，以便于每個實驗人員都能正確安全操作。為了防止漏氣，在氣瓶出口處填上膠皮，在氣壓表接處纏上封條，氣瓶與氣壓表接合后，用肥皂水進行氣密性測試，當(dāng)看到接口處沒有氣泡產(chǎn)生時便為合格。

　　三、CO2零點漂移監(jiān)測：

　　在使用培養(yǎng)箱的過程中，CO2壓力零點會出現(xiàn)自然漂移，這一現(xiàn)象在箱面氣體顯示框中無法看到，實驗人員也很難察覺到漂移結(jié)果，細胞培養(yǎng)液顏色異常，細胞生長緩慢甚至死亡。二氧化碳氣壓的零點是否漂移，可以通過CO2氣體檢測儀，取箱檢查氣體來確定。例如，我們測試了6個培養(yǎng)箱，其顯示值均在5%左右，測試結(jié)果是2個培養(yǎng)箱內(nèi)、外氣壓值一致，其余4個培養(yǎng)箱內(nèi)、外氣壓值最高，最高為18%，最低為0.5%，這些異常氣壓值對細胞實驗結(jié)果有影響。為此，實驗室應(yīng)建立CO2氣壓零點測試系統(tǒng)，該系統(tǒng)一般每3個月測試一次，以確保CO2氣壓實際使用值正確。

　　四、培養(yǎng)箱濕度監(jiān)測

　　二氧化碳培養(yǎng)箱在使用過程中，需要在培養(yǎng)箱托盤上放入一定量的殺菌水(3/2至全盤)，使培養(yǎng)箱處于濕度飽和的環(huán)境中，這是為了滿足開放培養(yǎng)細胞的要求。由于在飽和濕度的環(huán)境下培養(yǎng)液中的CO2不會發(fā)生逃逸，使培養(yǎng)液的pH值趨于穩(wěn)定，有利于細胞的生長。實驗中，由于實驗人員經(jīng)常忘記補水，使培養(yǎng)的細胞經(jīng)常處于低濕甚至干燥的高溫環(huán)境中，導(dǎo)致培養(yǎng)液中的CO2氣體易揮發(fā)，液體pH升高，影響細胞生長。為了防止此類情況的發(fā)生，我們采用了箱面大字警示與值日生責(zé)任制度相結(jié)合的辦法，使這一措施得到了很好的落實。另外，針對箱內(nèi)濕熱環(huán)境易感染細菌等問題，我們采用在1000ml水中加入2ml新潔爾滅液，對箱內(nèi)空氣進行定期消毒，對培養(yǎng)物進行酒精消毒，以降低箱內(nèi)微生物感染速度。在實驗中，培養(yǎng)基分區(qū)存放，培養(yǎng)物用筐或瓷盤存放，這樣能快速存取，縮短開門時間，減少箱內(nèi)氣體和濕度的變化，節(jié)省氣體，穩(wěn)定細胞生長環(huán)境。

　　如前所述，二氧化碳培養(yǎng)箱在使用過程中，只要做好室溫、濕度和CO2氣壓的零點試驗及校正工作，就可以保證CO2培養(yǎng)箱的正常運轉(zhuǎn)，使其成為培養(yǎng)細胞舒適的搖籃。